基因过表达
工具载体介绍
| 表达系统 | 真核表达载体 | 慢病毒载体 | 重组腺相关病毒载体 | 重组腺病毒载体 |
|---|---|---|---|---|
| 载体基因特性 | 双链DNA质粒 | RNA逆转录病毒 | 单链DNA病毒 | 双链DNA病毒 |
| 外源基因表达时间 | 24h开始表达，持续3-7天 | 2-4天开始表达，长时间稳定表达 | 7-14天开始表达 | 1-2天开始表达 |
| 插入片段大小 | 8kb左右 | 4kb左右 | 2.8kb左右 | 6kb左右 |
| 稳定细胞株筛选 | 难操作 | 可以 | 不可以 | 不可以，瞬时表达 |
| 细胞实验 | 细胞系，部分转染效率低 | 首选，广谱，感染效率高 | 不适合 | 广谱，感染效率高 |
| 动物实验 | 不适合 | 适合，根据观察时间和注射部位 | 首选，根据观察时间和注射部位 | 免疫原性高，慎选 |
| 滴度范围 | 无 | 108~109TU/ml | 1012-1013vg/ml | 1010-1011pfu/ml |
载体图谱中常见元件介绍
| 元件名称 | 类型 | 用途 |
|---|---|---|
| 启动子 | CMV、CBh、CAG、Syn等 | 广谱或特异启动目的基因的表达 |
| 常用标签 | EGFP、mCherry、mNeonGreen等 | 荧光标签，与目的基因非融合表达可检测转染、感染效果 |
| 3×Flag、HA 、His等 | 目的基因融合表达，用于检测 | |
| 抗性基因 | Puromycin、Neo、Hygro等 | 真核抗性，主要用于稳转株筛选 |
| Ampicillin、Kanamycin | 原核抗性，常用于原核细胞筛选 | |
| 连接元件 | IRES、2A | 用来连接表达两个基因 |
| 其它元件 | WPRE | 增加目的基因的表达 |
载体选择（部分）
| 载体类别 | 编号 | 载体元件 |
|---|---|---|
| 慢病毒过表达 | H155 | pLenti-CMV-MCS-3FLAG |
| GL121 | pSLenti-EF1a-EGFP-CMV-MCS | |
| GL107 | pSLenti-EF1a-EGFP-P2A-Puro-CMV-MCS-3Flag | |
| GL109 | pSLenti-EF1a-EGFP-F2A-Puro-CMV-MCS | |
| GL122 | 首选，广谱，感染效率高 | |
| 腺病毒过表达 | H225 | pAdeno-MCMV-MCS-3FLAG |
| H201 | pAdeno-MCMV-EGFP-3FLAG | |
| H213 | pAdeno-MCMV-3FLAG-EGFP | |
| 腺相关病毒过表达 | AOV024 | pAAV-CMV-EGFP-2A-MCS-3FLAG |
| AOV025 | pAAV-CMV-mCherry-P2A-MCS-3FLAG | |
| AOV064 | pAAV-SYN-EGFP-P2A-MCS-3FLAG | |
| AOV065 | pAAV-SYN-mCherry-P2A-MCS-3FLAG | |
| H9429 | pAAV-CAG-MCS-EGFP-3FLAG-CW3SL | |
| H9525 | pAAV-CMV-MCS-EGFP-3FLAG-CW3SL | |
| H10881 | pAAV-CAG-MCS-EGFP-3FLAG-CW3SL | |
| H10886 | pAAV-CMV-MCS-EGFP-3FLAG-CW3SL |
服务简介
样本类型病毒载体服务流程
相关技术服务
基因干扰
CRISPR/Cas9
内源性转录激活/抑制
内源性转录激活/抑制
内源性转录激活/抑制
