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内源性基因转录激活/抑制
通过人为突变Cas9的RuvC1、HNH两个剪切位点,Cas9蛋白的切割能力损失变成dCas9蛋白,dCas9和sgRNA复合物可以在DNA的特定位置结合在DNA上,在此基础上,研究人员在复合物的后方连接一些转录调控元件,如转录激活的VP64、VP16等,转录抑制的KRAB等,同时将复合物锚定在基因转录起始区域的上游,即可实现对特定基因的转录激活或转录抑制。
优势
相关技术服务
优势
① 常规基因过表达都是将外源基因转入,外源基因的兼容性必然低于内源基因。
② 对于一些涉及多次跨膜的蛋白,外源转入的基因常表达功能不完整的蛋白,导致过表达无效,而对内源基因的转录激活无需担心此问题。
③ 由于容量问题,很多大的基因片段难以构建进载体,而基于dCas9蛋白的转录激活识别的是转录起始点,对于基因大小无要求,因此可用于研究大基因片段的过表达。
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