结果展示
circMTO1吸附miR-9参与肝癌发展
1.样本来源
289例HCC和癌旁样本（7对样本用于芯片检测）
2.技术手段
circRNA芯片、circRIP（circRNA pull down）、FISH 、IHC、qPCR
为了进一步验证，研究者在261例HCC患者的样本中检测其表达量，发现circMTO1在87.4%（228例）的样本都是低表达的
收集116例HCC患者的生存期数据，通过在组织芯片上做原位杂交（ISH），发现circMTO1在这些样本中依然是显著下调，并且circMTO1的下调与HCC患者的不良预后显著相关
通过MiRanda 预测，有99个miRNA可能是circMTO1的靶标。利用RNA in vivo precipitation（RIP）检测到20个miRNA。其中miR-9与circMTO1共特异性富集。通过FISH发现circMTO1与miR-9共定位于胞浆中，以上的实验结果表明，circMTO1与miR-9在胞浆中结合。
细胞实验表明：HepG2和 SMMC-7721细胞中，沉默circMTO1表达会促进细胞的增殖及其迁移并抑制凋亡；QGY-7701和SK-Hep1 HCC细胞中过表达circMTO1则会促使细胞凋亡；沉默circMTO1或者过表达miR-9，都会使p21的mRNA和蛋白表达水平降低，而过表达circMTO1则会其相反的结果；抑制miR-9的表达可以明显减弱在circMTO1表达下调时介导的对p21蛋白及其mRNA水平的表达抑制效果。也可以阻断circMTO1沉默介导的细胞增殖和抑制凋亡的作用。
成瘤实验结果表明：皮下移植人类HCC组织构建HCC裸鼠移植瘤动物模型（SMMC-LTNM）；circMTO1 沉默（siRNA）两周后，小鼠的肿瘤生长速度明显加快，血清AFP升高；体内敲低（knock down） circMTO1后，p21和下游的CDK2表达被抑制，细胞迁移和扩散的标记物MMP2和PCNA表达上调。
结果展示
1.主成分分析(PCA)
通过 PCA 分析，考察样品的分布情况，验证实验设计的合理性，生物学重复样品的均一性，用二维图展示。同组的样品在二维空间分布比较集中，说明这些基因选取具有代表性，生物学重复好。
2.差异 lncRNA 表达水平聚类分析
差异 lncRNA 表达水平聚类分析, 我们采用 log10(norm 值)进行lncRNA 表达量展示。同时也可以将差异lncRNA 的 norm 值通过Z 值方式进行展示。其中横坐标为样本，纵坐标为基因，不同的颜色表示不同的基因表达水平，颜色由蓝色至红色表示表达量从低到高。红色表示高表达基因，蓝色表示低表达基因。
3.互作网络分析
使用 Perl 或 Python 等脚本语言构建三种 RNA （mRNA-miRNA-ncRNA(lncRNA,circRNA)）之间的关系。利用 Cytoscape软件，针对三种 RNA 之间的关系，构建出ceRNA network 网络关系图。
