在细胞相关的实验操作中，对于一些用常规方法难以转染的细胞，通常通过慢病毒感染的方式将靶基因随机整合到宿主的基因组中，从而增加转染效率，并能够在细胞系中稳定表达若干代，可进行稳定细胞株的筛选。

如何进行慢病毒包装?

1. 首先进行载体构建(过表达、干扰);

2. 然后将包装慢病毒过程中需要用到的三质粒进行高纯度无内毒素抽提;

3. 细胞的选择及铺板：我公司选用的是293T细胞进行慢病毒的包装，良好的293T细胞状态是病毒包装的首要关键因素，细胞代数不宜超过30代。首先，第一天胰酶消化293T细胞，血球计数板计数，用新鲜的DMEM完全培养基重悬细胞，按适当比例将细胞铺于10cm平皿中，每皿培养基体积为10ml，置于37°C，5%CO2培养箱中培养，待第二天转染前细胞密度达到80%-90%即可;

4. 第二天进行质粒转染，按一定比例将骨架质粒、包装质粒、包膜质粒(不同的质粒采用的比例有所不同，需要进行摸索)溶于1500μl的opti-MEM中，轻柔混匀后，室温放置5min;将转染试剂PEI同样溶于1500μl的opti-MEM中，轻柔混匀后，室温放置5min;将静置5min后的质粒和转染试剂轻柔混合，室温放置20min，然后将混合液加入到培养皿中，轻轻混匀，不要将细胞吹起，置于37°C，5%CO2培养箱中培养;

5. 6-8h后，吸弃培养皿中的培养基，加入20mL新鲜的低血清DMEM培养基，置于37°C，5%CO2培养箱中继续培养;

6. 72h后，收细胞上清于50ml离心管中，用0.45μm滤器过滤;

7. 将病毒原液装进专用离心管中，利用超高速低温离心机进行浓缩，弃上清，静置2-3min左右，吸走多余液体，加入1mlOPTI-MEM溶解病毒沉淀，收集于1.5ml EP管中，置于4°C溶解过夜，溶解好后立即将病毒液分装，保存于-80°C。

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