腺病毒ADV

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腺病毒包装与纯化

　　腺病毒包装中表达质粒与穿梭质粒共转染293T细胞，待细胞出现CPE状态后通过收集和过滤细胞裂解物而纯化。

　　

　　CPE（Cytopathic Effect）：病毒对组织培养细胞侵染后产生的细胞变性，利用此种病变效应可进行病毒定量。

腺病毒滴度检测

　　检测方法：酶联免疫法腺病毒滴度测定，根据计算感染后染成褐色的阳性细胞数，来计算病毒滴度

　　

　　实验原理：腺病毒感染的阳性细胞表达的衣壳蛋白被染成褐色

　　

　　检测方法：免疫显色方法。

　　

　　实验原理：通过抗5型腺病毒外壳蛋白的单抗与感染腺病毒样品的细胞结合，再用HRP标记的二抗与一抗结合，经显色液显色，被感染的细胞变成褐色，根据阳性细胞数，来计算病毒滴度。

腺病毒载体优势

① 表达快，腺病毒感染细胞后，1-2天即可表达
② 载体容量大，感染效率高，常用于感染难感染的细胞
③ 不整合到染色体中，无插入致突变性
④  具有嗜肝性，易于感染肝细胞，腺病毒的体内应用通过是用于感染肝脏

　　不过由于腺病毒免疫原性高，对某些对外源刺激敏感的动物模型和组织中易造成炎症，体内应用需谨慎。

　　

　　载体选择

　　

　　和元上海拥有丰富的腺病毒产品，用于操作编码基因和非编码基因，如lncRNA、microRNA、circRNA。以下腺病毒载体可供您选择：

载体用途	载体编号	载体名称（载体元件顺序）	真核抗性	荧光	启动子	默认标签	载体容量
过表达	H225	pAdeno-MCMV-MCS-3FLAG	N/A	N/A	MCMV	3FLAG	>6kb
	H201	pAdeno-MCMV-EGFP-3FLAG	N/A	EGFP	MCMV	3FLAG	>5kb
	H202	pAdeno-MCMV-3Flag-IRES2-EGFP	N/A	EGFP	MCMV	3FLAG	>5kb
	H13913	pAdeno-MCMV-MCS-3FLAG-IRES2-mNeonGreen	N/A	mNeonGreen	MCMV	3FLAG	>5kb
	H213	pAdeno-MCMV-3FLAG-EGFP	N/A	EGFP	MCMV	3FLAG	>5kb
	H220	pAdeno-MCMV-EGFP-P2A-MCS-3FLAG	N/A	EGFP	MCMV	3FLAG	>5kb
	H223	pAdeno-MCMV-DsRed2-P2A-MCS-3FLAG	N/A	DsRed2	MCMV	3FLAG	>5kb
	H205	pAdeno-MCMV-HA-P2A-EGFP	N/A	EGFP	MCMV	HA	>5kb
	H221	pAdeno-MCMV-3Flag-P2A-EGFP	N/A	EGFP	MCMV	3FLAG	>5kb
	H204	pAdeno-MCMV-mCherry-Ha	N/A	mCherry	MCMV	HA	>5kb
	H222	pAdeno-MCMV-3Flag-T2A-mcherry	N/A	mCherry	MCMV	3FLAG	>5kb
	H12588	pAdeno-EF1A(S)-mNeonGreen-CMV-MCS-3FLAG	N/A	mNeonGreen	CMV	3FLAG	>4kb
	H12589	pAdeno-EF1A(S)-mScarlet-CMV-MCS-3FLAG	N/A	mScarlet	CMV	3FLAG	>4kb
circRNA 过表达	H6946	pAdeno-CMV-CCDB	N/A	N/A	CMV	N/A	>5kb
miRNA 过表达	H216	pAdeno-U6-Mir30-CMV-EGFP	N/A	EGFP	U6	N/A	N/A
干扰	DKD001	pDKD-CMV-eGFP-U6-shRNA	N/A	EGFP	U6	N/A	N/A
	DKD004	pDKD-CMV-mcherry-U6-shRNA	N/A	mCherry	U6	N/A	N/A
	H7045	pDKD-CMV-MCS-U6-shRNA	N/A	N/A	CMV/U6	N/A	N/A
CRISPR敲除	H5064	pAdeno-U6-spgRNA v2.0-CMV-3Flag-spCas9	N/A	N/A	U6	N/A	N/A
	H9350	pAdeno-U6-spgRNAv2.0-CMV-sfGFP-P2A-3Flag-spCas9	N/A	sfGFP	U6	N/A	N/A
	H5066	pAdeno-U6-spgRNA v2.0-CMV-EGFP	N/A	EGFP	U6	N/A	N/A
	H218	pAdeno-CMV-mCherry-T2A-3Flag-spCas9	N/A	mCherry	CMV	N/A	N/A
	H5449	pAdeno-CMV-mCherry-T2A-3Flag-eSpCas9_1.1	N/A	mCherry	CMV	N/A	N/A

应用实例

　　1.Hepatology. (IF=14.079). Zhou YF,et.al. (2018). Cystathionine β-synthase is required for body iron homeostasis. [腺病毒, 肝脏]

　　

　　注射部位：肝脏

　　

　　载体名称：Ad-CBS

　　

　　注射方式：尾静脉

　　

　　注射量：10ul，1 x1011 PFU/mL

　　

　　检测时间：1周

　　

　　2. Diabetes. (IF=8.095). Xiao Y Z,et.al. (2015). Activation of ERK1/2 ameliorates liver steatosis in leptin receptor deficient (db/db)mice via stimulating ATG7-dependent autophagy. [腺病毒, 肝脏]

　　

　　注射部位：肝脏

　　

　　载体名称：Ad-ATG7

　　

　　注射方式：尾静脉

　　

　　注射量：1 x109 PFU /mice

　　

　　检测时间：10天

　　

　　3. Molecular Neurobiology. (IF=5.397). Guo J,et.al. (2015). Overexpression of Fibulin-5 Attenuates Ischemia/Reperfusion Injury After Middle Cerebral Artery Occlusion in Rats. [腺病毒, 大鼠]

　　

　　注射部位：大鼠大脑皮层

　　

　　载体名称：Ad-FBLN

　　

　　注射方式：脑立体定位注射

　　

　　注射量：三种不同剂量

　　

　　检测时间：7天

　　

　　和元生物腺病毒的生产和指控采取了国际学术界公认的标准流程，采用二质粒系统在293细胞中进行包装。所获得的病毒颗粒经过超速梯度离心和过滤，并通过壳蛋白免疫法进行滴度测定。一般情况下腺病毒的滴度在1010~1011pfu/ml，完全可以满足各类实验的使用要求。