外泌体服务



外泌体

外泌体是细胞分泌到胞外的一种囊泡（Extracellular Vesicles，EVs），其大小为30-150nm，具有双层膜结构和茶托状形态，广泛存在于细胞培养上清及各种体液中，包括血液、淋巴液、唾液、尿液、卵泡液、精液、心包液、乳汁等。外泌体含有丰富的内含物（包括核酸、蛋白和脂质等），参与细胞间的分子传递。所有的细胞都能分泌外泌体，但是不同细胞分泌的外泌体不管在数量上还是在内含物中都具有很大的差异性，这也决定了每种外泌体所行使的功能不一样。



外泌体的功能

外泌体携带大量特异性的蛋白质（如细胞因子、生长因子）以及功能性的mRNA、miRNA等生物活性物质，在体内参与免疫应答、抗原提呈、细胞迁移、细胞分化、促血管新生等生理过程，与多种疾病的发生和进程密切相关。由于外泌体的特殊结构和功能，使得它具有潜在的应用价值，一方面可以作为诊断多种疾病的生物指标，另一方面也可以作为治疗手段，未来有可能作为药物的天然载体用于临床治疗。



外泌体的分离

外泌体的样本来源主要有细胞培养上清、血清/血浆、尿液、腹水、乳汁、脑脊液、唾液、滑液等，其中细胞培养上清、血清/血浆、尿液是最常见的来源。如果是使用细胞培养上清，要注意细胞培养中一定不能添加FBS。

外泌体分离方法有很多种，包括超速离心、过滤离心、密度梯度离心、免疫磁珠和商用试剂盒。但是这么多方法中，通常推荐选用超速离心法进行提取和分离，因为超速离心方法得到的外泌体不管是从得率还是纯度上都比较好。其他方法的特点如下：

过滤离心：得率比较低
密度梯度离心：步骤繁琐，得率较低
免疫磁珠：特异性比较高，得率较低
商用试剂盒：价格高，效果一般
综合以上，超速离心法是目前价格适中、得率和纯度都能兼得的一种方法。



外泌体鉴定

外泌体鉴定是进一步研究外泌体功能和机制的工作基础。目前的鉴定方法主要包括透射电子显微镜（TEM）进行形态学观察、纳米颗粒追踪分析（NTA）进行粒径和密度分析、用WB进行蛋白标志物的鉴定。WB鉴定包括CD63、CD9、CD81、TSG101、Hsp70、syntenin1等。



外泌体的研究

外泌体的研究方向主要包括以下三个方面：

寻找疾病诊断和预后的分子标志物。
揭示疾病发病机制，从微环境角度解释细胞之间通讯促进疾病发生的原因。
外泌体作为药物载体，实现靶向给药。